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      湿热灭菌验主方案

      发布日期:2016-02-22 15:34

      时间:2016-02-22 15:34:14

       

      1目的
      本验证是为了确认灭菌器的各种功能可以达到生产要求,设备能够在预定的操作范围之内稳定运行,其性能满足生产工艺的要求。
      2范围
      本验证范围是确认微生物实验室灭菌柜能够满足生理盐水、微生物检测用具等物品的灭菌要求,此次验证主要包括空载热分布测试、满载热分布测试、满载热穿透实验。
      此验证方案计划于2014年1月17日-10月25日给予实施。
      3 概述
      3.1 设备描述
      设备名称 压力蒸汽灭菌器 设备编号  
      制造商 合肥华泰医疗设备有限公司 灭菌容积 150L
      安装地点   材质  
      设备结构描述 设备主要由主体、密封圈、灭菌筐、加热盘管几部分组成。
      主要技术参数 最高工作压力 0.165MPa
      额定工作温度 125℃
      热均匀度 ≤±1℃
      电源电压 220V50Hz
      电热管功率 4.5KW
      工作原理描述 预热阶段:将水温升至100℃。
      升温阶段:放入物品后继续加热,使柜内温度逐渐升高。
      灭菌阶段:升温至设定值后,保持一定时间灭菌。
      冷却阶段:排放内部蒸汽。
      结束:当柜内压力达到安全压力时,工作结束。
      主要用途 用于*******等物品的灭菌。  
               
       

      3.2灭菌程序描述

      灭菌程序采用不低于121℃,30min。湿热灭菌程序包括以下阶段或步骤:
      ü  通饱和蒸汽;
      ü  加热;
      ü  灭菌;
      ü  冷却。
      实现灭菌的三个重要条件分别是:温度,时间和饱和蒸汽。
      典型的灭菌T~t曲线如下:

      3.3验证方法学描述

      3.4 D、Z、F0
      D值是微生物的耐热参数,是指在一定温度下将微生物杀灭90%,即使之下降一个对数单位所需的时间。D值越大,微生物耐热性越强。
      Z值是灭菌温度系数,是指某一种微生物的D值变化一个对数单位,灭菌温度应升高或下降的度数。其描述的是微生物对温度变化的敏感程度,Z值越大,微生物对温度变化的敏感程度越弱;通常Z取10。
      F0值为121℃下的标准灭菌时间。灭菌采用过度杀灭(Over Kill)的概念,即F0≥30。非121℃时的F0值按下公式进行计算:

      :灭菌时间;
      Z:灭菌温度系数,Z通常取10;
      3.5工艺参数设定
      项目 温度/运行时间
      空载热分布测试 121℃/30min
      满载热分布测试 121℃/30min
      满载热穿透测试及微生物挑战测试 121℃/30min
      4验证类别
      再验证
      5验证前准备
      5.1验证人员及职责
      5.1.1QC
      5.1.1.1负责起草、审核验证方案和报告;负责对参与验证的所有人员进行方案的培训,确定所有人员有能力实施本方案。
      5.1.1.2按照验证方案执行验证,收集验证数据并分析、总结报告;
      5.1.1.3负责记录验证执行过程中出现的所有偏差,对关键的偏差应调查,在偏差关闭之前不得执行随后的验证工作。
      5.1.2质量部
      5.1.2.1负责审核验证方案和报告;
      5.1.2.2负责验证过程样品的检测。
      5.1.2.3负责审核方案和验证报告;
      5.1.2.4参与验证过程偏差的调查;
      5.1.2.5负责验证技术支持;
      5.1.2.6负责对环境进行监测;
      5.1.3质量负责人
      5.1.3.1负责批准验证方案和报告。
      5.1.2验证小组成员及分工
       
      姓名 部门 在本验证小组中担任的职务 岗位 职责
      柴景明   质管部 组长   负责方案的起草,对验证方案进行培训并组织实施。
        质管部 组员 质微生物检验员 负责设备运行前各项目检查及设备运行的操作。
        质量部 组员   负责生物指示剂的培养检测。
      王莹 质量部 组员   监督过程的实施,并负责取样
      5.1.3人员资格审查及方案培训的确认
      本验证小组所有成员在验证之前应接受相关的培训,如验证方案、设备操作SOP、安全注意事项等,并有记录。培训记录见附表1《人员培训记录》。
      审查项目 审查方法 存放地点
      人员培训档案 检查职工培训记录卡 职工档案
      验证方案的培训记录 检查培训记录卡 验证报告
      结论:
      确认人/日期:                                     复核人/日期:
      5.2验证引用文件的确认
      5.2.1审查项目、审查方法、接受标准
      审查项目 审查方法 接受标准
      文件的审批 检查文件 文件经有资格的人员起草、审核和批准
      文件的执行 检查文件 文件在执行期内
      5.2.2验证引用文件的确认
      序号 文件/资料名称 文件编码 执行日期 版本号
      1 湿热灭菌标准操作规程      
      3 ***灭菌标准操作规程      
      4 洁净服、洁净鞋灭菌标准操作规程      
      5 药品生产验证指南2003      
      6 验证管理标准      
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      5.3仪器仪表校验的确认
      5.3.1审查项目、审查方法、接受标准
      审查项目 审查方法 接受标准
      校验记录 仪器仪表校验记录及其校验合格证 仪器仪表都经过了校验,且都在校验期内、校验结果为合格。
      仪器仪表校验的确认见附表2《仪器仪表校验记录》
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6验证内容及合格标准
      6.1相关条件的确认
      6.1.1设备确认
      6.1.1.1检查方法:确认设备安装位置及安装牢固性,各附件完整性,检查设备密封圈密封性能及灭菌器各接口处密封是否良好。
      6.1.1.2接受标准:设备安装位置正确,安装牢固,各附件完整,密封圈密封性能及灭菌器各接口处密封良好,均符合技术参数要求和工艺要求。
      6.1.1.3测试记录:见附表3《设备确认记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.2公用设施连接确认
      6.1.2.1检查方法:检查灭菌柜是否连接电源、水源、管路开关等设施。
      6.1.2.2接受标准:均已连接。
      6.1.2.3测试记录:见附表4《公用设施连接检查记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.3清洗确认
      6.1.3.1检查方法:要求用不脱落纤维的已清洁的抹布擦拭灭菌器内部。
      6.1.3.2接受标准:清洁部位光亮,用洁净抹布擦拭无黑点等异物。
      6.1.3.3测试记录:见原始记录《湿热灭菌器清洁记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.4水位检查。
      6.1.4.1检查方法:查看灭菌器内水位是否在现位器以上,以确认灭菌柜使用的水源是否合格。
      6.1.4.2可接受标准:水位在现位器以上。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.5  生物指示剂确认
      6.1.5.1可接受标准:指示剂在有效期内;每支指示剂含芽孢不少于1×106。
      6.1.5.2确认记录
      名称 生产批号 有效期至 含芽孢量 D值 生产厂家
      嗜热脂肪芽孢
      杆菌孢子生物指示剂(ATCC7953)
               
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.2验证步骤
      6.2.1空载程序验证
      6.2.1.1空载热分布测试
      (1)将12支留点温度计入灭菌室内。
      (2)一支留点温度计放在温度控制传感器旁,其于留点温度计均置于腔室各处(留点温度计分布见下图),留点温度计的测温点不得与金属其他表面接触。
      (5)测试见附表7《空载热分布测试记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.2.1.2满载热分布测试
      (1)最大装载量的确认:
      装载方式:无菌服;(8件/包);细布20块、****。
       
      (2)满载热分布测试A、在灭菌器中按最差装载方式放入****物品,把12支留点温度计按照热分布探头布局图(照片见附表16)所示放入室内。
      B、启动灭菌器,达到灭菌温度后,温度应不低于121℃,运行30min。
      C、灭菌结束降温后,取出温度计记录数据并分析,如果符合满载热分布测试的标准,依照此操作程序进行其余一次测试。
      D见附表8《满载热分布测试记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.2.1.3热穿透实验
      (1)打开灭菌器,按照指定的最差装载方式将被灭菌物品放置在腔室中,随后将12个温度计按预先确定的布点图,放置在被灭菌物品内部,同时每只温度计上放置一个生物指示剂,其中在最差装载条件下得出的冷点位置放置两个生物指示剂,上盖密封。
      (2) 使用嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂Bacillus stearothermophilus。
      (3)启动灭菌器,达到灭菌温度后,温度应不低于121℃,运行30min。
      (4)灭菌结束,待冷却后,立即取出所有生物指示剂,进行微生物培养。
      (5)分别在嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂培养基中培养,培养温度55-60℃,24h后、48h后及7天后记录指示剂变化情况,并记录,同时取一支未经处理的生物指示剂作为阳性对照。
      (6)培养后的生物指示剂如有任何一支指示剂变黄,则表明有细菌生长,如果颜色没有变化,则表明灭菌有效。
      (7)灭菌结束降温后,取出温度计记录数据并分析。
      (8)见附表9-11《满载热穿透测试记录》、《生物指示剂测试记录》《生物指示剂孢子数量确认记录》。
      结论:
       
      确认人/日期:
      6.2.1.4灭菌后物品质无菌检查
      (1)测试程序:满载测试时,每次选取接近灭菌柜最冷点的物品两套。同时将上述三批物品放置至有效期(24小时)后,再进行一次无菌检查。
      (2)检查方法
      A、灭菌后检查:按照《洁净区微生物监测标准操作规程》对灭菌后的物品进行菌落检查。接触面积24~30cm2,迅速盖好盖,放入30~35℃倒置恒温培养72小时,同时取三个空白双碟做阴性对照,计菌落数,填写《物品菌落检测记录》。
      B、有效期检查:将物品存放在**** 级下,放置24小时后取出,按照按照《洁净区微生物监测标准操作规程》进行检测,样品编号分别为(A24、、、、、、、、)。
      C 标准:灭菌后及放置到有效期后的物品菌落数为0,检查合格率100%??瞻着嘌哉站蘧?。
      D、见附表12-13《物品菌落检测记录Ⅰ》、《物品菌落检测记录Ⅱ》
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
       
       
                                         复核人/日期:
      6.3 验证合格标准
      项目 温度/运行时间
      保压实验 压力达到0.15MPa,保持15min,密封圈无泄漏。
      连续三次空载热分布 温度计全部在121℃―123℃,灭菌时间≥30min,灭菌温度波动≤2℃,灭菌温度均匀性≤±1℃。
      连续三次满载热分布 温度计全部在121℃―123℃,灭菌时间≥30min,灭菌温度波动≤2℃,灭菌温度均匀性≤±1℃。
      连续三次满载热穿透实验及生物指示剂实验 各点温度均在121.1℃以上,灭菌时间≥30min,Fo值≥30min。
      在55-60℃下嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂培养7天后,指示剂不变色,对照样在24h内,指示剂变黄色。
      灭菌后物品无菌检查 灭菌后及放置到有效期后的物品菌落数为0,检查合格率100%??瞻着嘌哉站蘧?。
       
      6.4数据统计及分析
      对验证结果进行数据统计分析确认脉动真空灭菌柜测试符合要求。
      7偏差分析
      对验证过程中所发生的偏差进行处理和分析,并制定纠正预防措施,必要时要重新进行验证。如有偏差,要完成偏差处理与分析报告表。见附表15。
      在验证过程中如果出现个别项目的不合格情况,应该对不符合项进行偏差分析,找出原因进行整改。对不符合项重新确认。
      在检测过程中如果出现检测项目不合格的情况,认真分析原因,如果属系统问题,进行整改,整改后重新验证。如果是取样或化验原因,重新取样对不合格的指标重新化验。
      结论:
                                         评价人/日期:
      8变更处理
      本方案在实施过程中如发生变更,应将与变更有关的所有信息记录下来,并进行分析与评价,填写验证变更申请表。见附表16。
      结论:
                                         评价人/日期:
      9验证总结及评价
      通过对灭菌器性能的检测结果进行数据分析总结,确认灭菌器及辅助系统的每一部分功能都能达到生产工艺要求,由验证小组组长对验证过程及结果进行综合评价,评价所要验证的内容是否已达到验证合格标准,验证结论是否有效。确定本次验证的结论。
      结论
       
                                        
                           评价人/日期:
      10再验证周期
      灭菌器验证周期为1年;发生以下变更时,需要再验证:
      (1)设备更换、改造或大修后;灭菌工艺发生改变;
      (2)灭菌物品发生改变;
      (3)灭菌物品装载形式、装载量发生变化。
       
      11文件的修订
      根据本方案实施过程中所发现的问题,对相应的SOP进行补充和完善,补充及完善的内容列入下表中。
      文件编号 文件名称 修订内容
           
           
           
           
      12附表及附录
      附表清单
      序号 编号 名称
      1   培训确认表
      2   仪表校验检查记录
      3   设备确认记录
      4   泄漏测试记录
      5   空载热分布测试记录
      6   满载热分布测试记录
      7   满载热穿透测试记录
      8   生物指示剂测试记录
      9   生物指示剂孢子数量确认记录
      10   物品菌落检测记录Ⅰ
      11   物品菌落检测记录Ⅱ
      12   偏差处理与分析报告
      13   验证变更申请表

       
      附表1培训确认表
      培训确认表                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                           
      编号:              版本号:00                           第1页共1页
      主讲人   日期  
      培训
      内容
       
      参加人员:
      确认内容
      该验证所有参与成员均经过了培训且能胜任本次验证工作 □ 是       □ 否
      备注:
       
      确认人/日期  
                 
       
       
       
       
       
      附表2 仪表校验检查记录
      仪表校验检查记录
      编号:           版本号:00                       第1页共1页
      仪表名称 型号 编号 有效期至 检查结果 检查人 检查日期
      温度传感器            
      压力变送器            
                 
                 
                 
      温度验证仪            
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表3设备确认记录
       
      设备确认记录
      编号:                 版本号:00                    第1页共1页
      检查项目 检查方法 检查结果 检查人 检查日期
      设备型号 检查设备铭牌 是 □ 否 □    
      设备定位 检查灭菌器安装地点和位置,在*** 是 □ 否 □    
      材质 该蒸汽灭菌柜,采用316L不锈钢材料制作,密封圈材料为硅橡胶 是 □ 否 □    
      外观 确认机器外观是否良好,无缺陷和损坏 是 □ 否 □    
      操作与维护 有足够的空间进行操作和维护 是 □ 否 □    
      加热形式 电加热 是 □ 否 □    
      加热功率 按说明书技术参数 是 □ 否 □    
      仪表型号 能满足工艺要求 是 □ 否 □    
      动力电源 三相四线、接地良好 是 □ 否 □    
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表5泄漏测试记录
       
      泄漏测试记录
      编号:                版本号:00              第1页共1页
      测试日期 开始时间
      t1
      开始压力
      P1
      结束时间
      t2
      结束压力
      P2
      泄漏率    P2- P1
                t2 - t1
                 
                 
                 
      标准 泄漏率标准:保压15min,每分钟不得超过0.13Kpa
      检查人/日期   复核人/日期  
       
       
       
       
                                                      

      附表7空载热分布测试记录
      空载热分布测试记录
      编号:              版本号:00                        第1页共1页
      共运行3次 第(  )次运行 验证程序  
      日期   温度设定点  
      热电偶编号  
       
      开始时间   灭菌开始时间  
      结束时间   灭菌结束时间  
      总时间   灭菌总时间  
      灭菌阶段热温度计
      最低温度
        灭菌阶段热温度计
      最高温度
       
      最低温度热温度计位置   最高温度热温度计位置  
      确认内容
      全部热温度计温度在121℃-123℃ 是 □ 否 □
      灭菌时间≥30min 是 □ 否 □
      每个测试点温度波动≤2℃ 是 □ 否 □
      保温期间测试点与平均值之间温度差≤±1℃ 是 □ 否 □
      备注:
       
       
       
       
       
       
      确认人   确认日期  
      复核人   复核日期  
                 
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表8满载热分布测试记录
      满载热分布测试记录
      编号:             版本号:00                第1页共1页
      项目                      满载热分布
      第一次 第二次 第三次



      预热时间      
      灭菌开始时间      
      灭菌结束时间      
      开机温度(℃)      
      灭菌温度(℃)      
      验证时间      
      验证数据 灭菌段 最高温度(℃)      
      热电偶位置      
      最低温度(℃)      
      热电偶位置      
      温差(℃)      
      确认内容
      全部热电偶温度在121℃-123℃ 是 □ 否 □
      灭菌时间≥30min 是 □ 否 □
      每个测试点温度波动≤2℃ 是 □ 否 □
      保温期间测试点与平均值之间温度差≤±1℃ 是 □ 否 □
      备注:
       
       
       
       
       
       
      确认人   确认日期  
      复核人   复核日期  
                         
       
       
       
       
       
      附表9 满载热穿透测试记录
      满载热穿透测试记录
      编号:                      版本号:00                         第1页共1页
      项目 (         )程序         满载热分布
      第一次 第二次 第三次
      相关数据 预热时间      
      灭菌开始时间      
      灭菌结束时间      
      开机温度(℃)      
      灭菌温度(℃)      
      验证时间      
      验证数据 灭菌段 最高温度(℃)      
      温度计位置      
      最低温度(℃)      
      温度计位置      
      温差(℃)      
      最小Fo值      
      热电偶位置      
      生物指示剂实验选点  
      确认内容
      全部温度在121℃-123℃ 是 □ 否 □
      灭菌时间≥30min 是 □ 否 □
      每个测试点温度波动≤2℃ 是 □ 否 □
      保温期间测试点与平均值之间温度差≤±1℃ 是 □ 否 □
      Fo值≥30min 是 □ 否 □
      备注:
       
       
       
       
      确认人   确认日期  
      复核人   复核日期  
                       
       
       
       
       
       
      附表10 生物指示剂测试记录
      生物指示剂测试记录
      编号:             版本号:00                          第1页共1页
      共运行3批                           (         )程序                        第(  )次运行
      生物指示剂名称                                      
      生物指示剂批号                     有效期至                    
      每片孢子数量                       D值                               
      生物指示剂生产厂家                        生化培养箱设备编号              
      检验条件要求:55-600C;培养7天。
      灭菌合格标准:指示剂无变色。           灭菌不合格:指示剂变为黄色
      培养温度:                 0C;   阳性对照24小时内是否变黄色  是    否      
      培养时间   日    时    分--    日   时   分
      样品颜色    不变色:- 变色:+
      指示剂编号 24小时 48小时 168小时
      对照      
      指示剂编号 24小时 48小时 168小时 指示剂编号 24小时 48小时 168小时
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
      检查人   检查日期  
      复核人   复核日期  
       
       
       
       
       
       
      附表11生物指示剂孢子数量确认记录
      生物指示剂孢子数量确认记录
      编号:                            版本号:00                         第1页 共1页
      日期  
      生物指示剂名称  
      生物指示剂批号  
      生产厂家  
      有效日期  
      使用部门  
      热处理温度  
      热处理时间 自      :     至      :      ,共       分钟
      培养基名称  
      培养基批号  
      0.9%氯化钠溶液批号  
      培养温度  
      培养时间  
      结果
      稀释级    
      接种量(ml)    
      计数结果 1 2 平均 1 2 平均
                 
      孢子数量    
      平均孢子数量  
      标准规定 每片/支生物指示剂的活芽孢数量不少于1×106
      结论 符合规定□                不符合规定□
      操作者/日期  
      复核者/日期  
       
       
       
       
       
       
      附表12物品菌落检测记录
      物品菌落检测记录Ⅰ
      编号:               版本号:00                第1页共1页
      物品名称 样品编号 检测结果
      cfu
      空白对照
        A        
        B        
        C        
        D        
        E        
        F        
        A        
        B        
        C        
        D        
        E        
        F        
      确认人/日期 复核人/日期
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表13物品菌落检测记录
       
      物品菌落检测记录Ⅰ
      编号:               版本号:00                第1页共1页
      物品名称 样品编号 检测结果
      cfu
      空白对照
        A24        
        B24        
        C24        
        D24        
        E24        
        F24        
        G24        
        H24        
        L24        
        I24        
        K24        
      确认人/日期 复核人/日期
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表15偏差处理与分析报告表
       
      偏差处理与分析报告表
      编号:                              版本号:00                         第1页 共1页
      偏差说明:
       
       
      签字/日期:
      偏差的分类
      □一般         □重大
      偏差情况调查:
       
       
       
      签字/日期:
      采取的措施(如需要,应另附文件)
       
       
       
      签字/日期:
      质量部意见:
       
       
                                                    
        签字/日期:
      处理结果:
       
       
       
      签字/日期:
      附表16验证变更申请表
      验证变更申请表
      编号:                            版本号:00                         第1页 共1页
      申请部门   申请日期  
      申请人   实施负责人  
      验证项目名称  
      变更内容(详细说明)  
      变更
      理由
       
      变更
      部门
      意见
      审核人(验证变更部门负责人):                         年   月   日
      质量部
      意见
          审核人(QA):                                        年   月   日
      验证领导小组组长意见 批准人(质量副总):                                    年   月   日
               
       
       
       
       
       
      附录15:标准热电偶分布图
      标准热电偶分布图

      注:1、2、3、4——灭菌室前门剖面四顶点,5、6、7、8——灭菌室后门剖面四顶点,9、10、11、16——灭菌室中间剖面四顶点,13——灭菌室中间剖面中心点,14—压缩空气入口,15—蒸汽入口,12--在冷凝水排放处(箱体底部)和温度控制和记录的传感器旁(箱体底部)。
       
      1目的
      本验证是为了确认灭菌器的各种功能可以达到生产要求,设备能够在预定的操作范围之内稳定运行,其性能满足生产工艺的要求。
      2范围
      本验证范围是确认微生物实验室灭菌柜能够满足生理盐水、微生物检测用具等物品的灭菌要求,此次验证主要包括空载热分布测试、满载热分布测试、满载热穿透实验。
      此验证方案计划于2014年1月17日-10月25日给予实施。
      3 概述
      3.1 设备描述
      设备名称 压力蒸汽灭菌器 设备编号  
      制造商 合肥华泰医疗设备有限公司 灭菌容积 150L
      安装地点   材质  
      设备结构描述 设备主要由主体、密封圈、灭菌筐、加热盘管几部分组成。
      主要技术参数 最高工作压力 0.165MPa
      额定工作温度 125℃
      热均匀度 ≤±1℃
      电源电压 220V50Hz
      电热管功率 4.5KW
      工作原理描述 预热阶段:将水温升至100℃。
      升温阶段:放入物品后继续加热,使柜内温度逐渐升高。
      灭菌阶段:升温至设定值后,保持一定时间灭菌。
      冷却阶段:排放内部蒸汽。
      结束:当柜内压力达到安全压力时,工作结束。
      主要用途 用于*******等物品的灭菌。  
               
       

      3.2灭菌程序描述

      灭菌程序采用不低于121℃,30min。湿热灭菌程序包括以下阶段或步骤:
      ü  通饱和蒸汽;
      ü  加热;
      ü  灭菌;
      ü  冷却。
      实现灭菌的三个重要条件分别是:温度,时间和饱和蒸汽。
      典型的灭菌T~t曲线如下:

      3.3验证方法学描述

      3.4 D、Z、F0
      D值是微生物的耐热参数,是指在一定温度下将微生物杀灭90%,即使之下降一个对数单位所需的时间。D值越大,微生物耐热性越强。
      Z值是灭菌温度系数,是指某一种微生物的D值变化一个对数单位,灭菌温度应升高或下降的度数。其描述的是微生物对温度变化的敏感程度,Z值越大,微生物对温度变化的敏感程度越弱;通常Z取10。
      F0值为121℃下的标准灭菌时间。灭菌采用过度杀灭(Over Kill)的概念,即F0≥30。非121℃时的F0值按下公式进行计算:

      :灭菌时间;
      Z:灭菌温度系数,Z通常取10;
      3.5工艺参数设定
      项目 温度/运行时间
      空载热分布测试 121℃/30min
      满载热分布测试 121℃/30min
      满载热穿透测试及微生物挑战测试 121℃/30min
      4验证类别
      再验证
      5验证前准备
      5.1验证人员及职责
      5.1.1QC
      5.1.1.1负责起草、审核验证方案和报告;负责对参与验证的所有人员进行方案的培训,确定所有人员有能力实施本方案。
      5.1.1.2按照验证方案执行验证,收集验证数据并分析、总结报告;
      5.1.1.3负责记录验证执行过程中出现的所有偏差,对关键的偏差应调查,在偏差关闭之前不得执行随后的验证工作。
      5.1.2质量部
      5.1.2.1负责审核验证方案和报告;
      5.1.2.2负责验证过程样品的检测。
      5.1.2.3负责审核方案和验证报告;
      5.1.2.4参与验证过程偏差的调查;
      5.1.2.5负责验证技术支持;
      5.1.2.6负责对环境进行监测;
      5.1.3质量负责人
      5.1.3.1负责批准验证方案和报告。
      5.1.2验证小组成员及分工
       
      姓名 部门 在本验证小组中担任的职务 岗位 职责
      柴景明   质管部 组长   负责方案的起草,对验证方案进行培训并组织实施。
        质管部 组员 质微生物检验员 负责设备运行前各项目检查及设备运行的操作。
        质量部 组员   负责生物指示剂的培养检测。
      王莹 质量部 组员   监督过程的实施,并负责取样
      5.1.3人员资格审查及方案培训的确认
      本验证小组所有成员在验证之前应接受相关的培训,如验证方案、设备操作SOP、安全注意事项等,并有记录。培训记录见附表1《人员培训记录》。
      审查项目 审查方法 存放地点
      人员培训档案 检查职工培训记录卡 职工档案
      验证方案的培训记录 检查培训记录卡 验证报告
      结论:
      确认人/日期:                                     复核人/日期:
      5.2验证引用文件的确认
      5.2.1审查项目、审查方法、接受标准
      审查项目 审查方法 接受标准
      文件的审批 检查文件 文件经有资格的人员起草、审核和批准
      文件的执行 检查文件 文件在执行期内
      5.2.2验证引用文件的确认
      序号 文件/资料名称 文件编码 执行日期 版本号
      1 湿热灭菌标准操作规程      
      3 ***灭菌标准操作规程      
      4 洁净服、洁净鞋灭菌标准操作规程      
      5 药品生产验证指南2003      
      6 验证管理标准      
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      5.3仪器仪表校验的确认
      5.3.1审查项目、审查方法、接受标准
      审查项目 审查方法 接受标准
      校验记录 仪器仪表校验记录及其校验合格证 仪器仪表都经过了校验,且都在校验期内、校验结果为合格。
      仪器仪表校验的确认见附表2《仪器仪表校验记录》
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6验证内容及合格标准
      6.1相关条件的确认
      6.1.1设备确认
      6.1.1.1检查方法:确认设备安装位置及安装牢固性,各附件完整性,检查设备密封圈密封性能及灭菌器各接口处密封是否良好。
      6.1.1.2接受标准:设备安装位置正确,安装牢固,各附件完整,密封圈密封性能及灭菌器各接口处密封良好,均符合技术参数要求和工艺要求。
      6.1.1.3测试记录:见附表3《设备确认记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.2公用设施连接确认
      6.1.2.1检查方法:检查灭菌柜是否连接电源、水源、管路开关等设施。
      6.1.2.2接受标准:均已连接。
      6.1.2.3测试记录:见附表4《公用设施连接检查记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.3清洗确认
      6.1.3.1检查方法:要求用不脱落纤维的已清洁的抹布擦拭灭菌器内部。
      6.1.3.2接受标准:清洁部位光亮,用洁净抹布擦拭无黑点等异物。
      6.1.3.3测试记录:见原始记录《湿热灭菌器清洁记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.4水位检查。
      6.1.4.1检查方法:查看灭菌器内水位是否在现位器以上,以确认灭菌柜使用的水源是否合格。
      6.1.4.2可接受标准:水位在现位器以上。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.1.5  生物指示剂确认
      6.1.5.1可接受标准:指示剂在有效期内;每支指示剂含芽孢不少于1×106。
      6.1.5.2确认记录
      名称 生产批号 有效期至 含芽孢量 D值 生产厂家
      嗜热脂肪芽孢
      杆菌孢子生物指示剂(ATCC7953)
               
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.2验证步骤
      6.2.1空载程序验证
      6.2.1.1空载热分布测试
      (1)将12支留点温度计入灭菌室内。
      (2)一支留点温度计放在温度控制传感器旁,其于留点温度计均置于腔室各处(留点温度计分布见下图),留点温度计的测温点不得与金属其他表面接触。
      探头分布整体透视图
      其他分布点的具体位置如上图所示:
      (3) 启动灭菌器 ,达到灭菌温度后,温度应不低于121℃,运行30min。
      (4)灭菌结束降温后,取出温度计记录数据分析,如果符合空载热分布测试的标准,依照此操作程序进行其余两次测试。
      (5)测试见附表7《空载热分布测试记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.2.1.2满载热分布测试
      (1)最大装载量的确认:
      装载方式:无菌服;(8件/包);细布20块、****。
      B层
      C层

       
      (2)满载热分布测试A、在灭菌器中按最差装载方式放入****物品,把12支留点温度计按照热分布探头布局图(照片见附表16)所示放入室内。
      B、启动灭菌器,达到灭菌温度后,温度应不低于121℃,运行30min。
      C、灭菌结束降温后,取出温度计记录数据并分析,如果符合满载热分布测试的标准,依照此操作程序进行其余一次测试。
      D见附表8《满载热分布测试记录》。
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
      6.2.1.3热穿透实验
      (1)打开灭菌器,按照指定的最差装载方式将被灭菌物品放置在腔室中,随后将12个温度计按预先确定的布点图,放置在被灭菌物品内部,同时每只温度计上放置一个生物指示剂,其中在最差装载条件下得出的冷点位置放置两个生物指示剂,上盖密封。
      (2) 使用嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂Bacillus stearothermophilus。
      (3)启动灭菌器,达到灭菌温度后,温度应不低于121℃,运行30min。
      (4)灭菌结束,待冷却后,立即取出所有生物指示剂,进行微生物培养。
      (5)分别在嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂培养基中培养,培养温度55-60℃,24h后、48h后及7天后记录指示剂变化情况,并记录,同时取一支未经处理的生物指示剂作为阳性对照。
      (6)培养后的生物指示剂如有任何一支指示剂变黄,则表明有细菌生长,如果颜色没有变化,则表明灭菌有效。
      (7)灭菌结束降温后,取出温度计记录数据并分析。
      (8)见附表9-11《满载热穿透测试记录》、《生物指示剂测试记录》《生物指示剂孢子数量确认记录》。
      结论:
       
      确认人/日期:
      6.2.1.4灭菌后物品质无菌检查
      (1)测试程序:满载测试时,每次选取接近灭菌柜最冷点的物品两套。同时将上述三批物品放置至有效期(24小时)后,再进行一次无菌检查。
      (2)检查方法
      A、灭菌后检查:按照《洁净区微生物监测标准操作规程》对灭菌后的物品进行菌落检查。接触面积24~30cm2,迅速盖好盖,放入30~35℃倒置恒温培养72小时,同时取三个空白双碟做阴性对照,计菌落数,填写《物品菌落检测记录》。
      B、有效期检查:将物品存放在**** 级下,放置24小时后取出,按照按照《洁净区微生物监测标准操作规程》进行检测,样品编号分别为(A24、、、、、、、、)。
      C 标准:灭菌后及放置到有效期后的物品菌落数为0,检查合格率100%??瞻着嘌哉站蘧?。
      D、见附表12-13《物品菌落检测记录Ⅰ》、《物品菌落检测记录Ⅱ》
      结论:
      确认人/日期:                                    复核人/日期:
       
       
                                         复核人/日期:
      6.3 验证合格标准
      项目 温度/运行时间
      保压实验 压力达到0.15MPa,保持15min,密封圈无泄漏。
      连续三次空载热分布 温度计全部在121℃―123℃,灭菌时间≥30min,灭菌温度波动≤2℃,灭菌温度均匀性≤±1℃。
      连续三次满载热分布 温度计全部在121℃―123℃,灭菌时间≥30min,灭菌温度波动≤2℃,灭菌温度均匀性≤±1℃。
      连续三次满载热穿透实验及生物指示剂实验 各点温度均在121.1℃以上,灭菌时间≥30min,Fo值≥30min。
      在55-60℃下嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂培养7天后,指示剂不变色,对照样在24h内,指示剂变黄色。
      灭菌后物品无菌检查 灭菌后及放置到有效期后的物品菌落数为0,检查合格率100%??瞻着嘌哉站蘧?。
       
      6.4数据统计及分析
      对验证结果进行数据统计分析确认脉动真空灭菌柜测试符合要求。
      7偏差分析
      对验证过程中所发生的偏差进行处理和分析,并制定纠正预防措施,必要时要重新进行验证。如有偏差,要完成偏差处理与分析报告表。见附表15。
      在验证过程中如果出现个别项目的不合格情况,应该对不符合项进行偏差分析,找出原因进行整改。对不符合项重新确认。
      在检测过程中如果出现检测项目不合格的情况,认真分析原因,如果属系统问题,进行整改,整改后重新验证。如果是取样或化验原因,重新取样对不合格的指标重新化验。
      结论:
                                         评价人/日期:
      8变更处理
      本方案在实施过程中如发生变更,应将与变更有关的所有信息记录下来,并进行分析与评价,填写验证变更申请表。见附表16。
      结论:
                                         评价人/日期:
      9验证总结及评价
      通过对灭菌器性能的检测结果进行数据分析总结,确认灭菌器及辅助系统的每一部分功能都能达到生产工艺要求,由验证小组组长对验证过程及结果进行综合评价,评价所要验证的内容是否已达到验证合格标准,验证结论是否有效。确定本次验证的结论。
      结论
       
                                        
                           评价人/日期:
      10再验证周期
      灭菌器验证周期为1年;发生以下变更时,需要再验证:
      (1)设备更换、改造或大修后;灭菌工艺发生改变;
      (2)灭菌物品发生改变;
      (3)灭菌物品装载形式、装载量发生变化。
       
      11文件的修订
      根据本方案实施过程中所发现的问题,对相应的SOP进行补充和完善,补充及完善的内容列入下表中。
      文件编号 文件名称 修订内容
           
           
           
           
      12附表及附录
      附表清单
      序号 编号 名称
      1   培训确认表
      2   仪表校验检查记录
      3   设备确认记录
      4   泄漏测试记录
      5   空载热分布测试记录
      6   满载热分布测试记录
      7   满载热穿透测试记录
      8   生物指示剂测试记录
      9   生物指示剂孢子数量确认记录
      10   物品菌落检测记录Ⅰ
      11   物品菌落检测记录Ⅱ
      12   偏差处理与分析报告
      13   验证变更申请表

       
      附表1培训确认表
      培训确认表                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                           
      编号:              版本号:00                           第1页共1页
      主讲人   日期  
      培训
      内容
       
      参加人员:
      确认内容
      该验证所有参与成员均经过了培训且能胜任本次验证工作 □ 是       □ 否
      备注:
       
      确认人/日期  
                 
       
       
       
       
       
      附表2 仪表校验检查记录
      仪表校验检查记录
      编号:           版本号:00                       第1页共1页
      仪表名称 型号 编号 有效期至 检查结果 检查人 检查日期
      温度传感器            
      压力变送器            
                 
                 
                 
      温度验证仪            
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表3设备确认记录
       
      设备确认记录
      编号:                 版本号:00                    第1页共1页
      检查项目 检查方法 检查结果 检查人 检查日期
      设备型号 检查设备铭牌 是 □ 否 □    
      设备定位 检查灭菌器安装地点和位置,在*** 是 □ 否 □    
      材质 该蒸汽灭菌柜,采用316L不锈钢材料制作,密封圈材料为硅橡胶 是 □ 否 □    
      外观 确认机器外观是否良好,无缺陷和损坏 是 □ 否 □    
      操作与维护 有足够的空间进行操作和维护 是 □ 否 □    
      加热形式 电加热 是 □ 否 □    
      加热功率 按说明书技术参数 是 □ 否 □    
      仪表型号 能满足工艺要求 是 □ 否 □    
      动力电源 三相四线、接地良好 是 □ 否 □    
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表5泄漏测试记录
       
      泄漏测试记录
      编号:                版本号:00              第1页共1页
      测试日期 开始时间
      t1
      开始压力
      P1
      结束时间
      t2
      结束压力
      P2
      泄漏率    P2- P1
                t2 - t1
                 
                 
                 
      标准 泄漏率标准:保压15min,每分钟不得超过0.13Kpa
      检查人/日期   复核人/日期  
       
       
       
       
                                                      

      附表7空载热分布测试记录
      空载热分布测试记录
      编号:              版本号:00                        第1页共1页
      共运行3次 第(  )次运行 验证程序  
      日期   温度设定点  
      热电偶编号  
       
      开始时间   灭菌开始时间  
      结束时间   灭菌结束时间  
      总时间   灭菌总时间  
      灭菌阶段热温度计
      最低温度
        灭菌阶段热温度计
      最高温度
       
      最低温度热温度计位置   最高温度热温度计位置  
      确认内容
      全部热温度计温度在121℃-123℃ 是 □ 否 □
      灭菌时间≥30min 是 □ 否 □
      每个测试点温度波动≤2℃ 是 □ 否 □
      保温期间测试点与平均值之间温度差≤±1℃ 是 □ 否 □
      备注:
       
       
       
       
       
       
      确认人   确认日期  
      复核人   复核日期  
                 
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表8满载热分布测试记录
      满载热分布测试记录
      编号:             版本号:00                第1页共1页
      项目                      满载热分布
      第一次 第二次 第三次



      预热时间      
      灭菌开始时间      
      灭菌结束时间      
      开机温度(℃)      
      灭菌温度(℃)      
      验证时间      
      验证数据 灭菌段 最高温度(℃)      
      热电偶位置      
      最低温度(℃)      
      热电偶位置      
      温差(℃)      
      确认内容
      全部热电偶温度在121℃-123℃ 是 □ 否 □
      灭菌时间≥30min 是 □ 否 □
      每个测试点温度波动≤2℃ 是 □ 否 □
      保温期间测试点与平均值之间温度差≤±1℃ 是 □ 否 □
      备注:
       
       
       
       
       
       
      确认人   确认日期  
      复核人   复核日期  
                         
       
       
       
       
       
      附表9 满载热穿透测试记录
      满载热穿透测试记录
      编号:                      版本号:00                         第1页共1页
      项目 (         )程序         满载热分布
      第一次 第二次 第三次
      相关数据 预热时间      
      灭菌开始时间      
      灭菌结束时间      
      开机温度(℃)      
      灭菌温度(℃)      
      验证时间      
      验证数据 灭菌段 最高温度(℃)      
      温度计位置      
      最低温度(℃)      
      温度计位置      
      温差(℃)      
      最小Fo值      
      热电偶位置      
      生物指示剂实验选点  
      确认内容
      全部温度在121℃-123℃ 是 □ 否 □
      灭菌时间≥30min 是 □ 否 □
      每个测试点温度波动≤2℃ 是 □ 否 □
      保温期间测试点与平均值之间温度差≤±1℃ 是 □ 否 □
      Fo值≥30min 是 □ 否 □
      备注:
       
       
       
       
      确认人   确认日期  
      复核人   复核日期  
                       
       
       
       
       
       
      附表10 生物指示剂测试记录
      生物指示剂测试记录
      编号:             版本号:00                          第1页共1页
      共运行3批                           (         )程序                        第(  )次运行
      生物指示剂名称                                      
      生物指示剂批号                     有效期至                    
      每片孢子数量                       D值                               
      生物指示剂生产厂家                        生化培养箱设备编号              
      检验条件要求:55-600C;培养7天。
      灭菌合格标准:指示剂无变色。           灭菌不合格:指示剂变为黄色
      培养温度:                 0C;   阳性对照24小时内是否变黄色  是    否      
      培养时间   日    时    分--    日   时   分
      样品颜色    不变色:- 变色:+
      指示剂编号 24小时 48小时 168小时
      对照      
      指示剂编号 24小时 48小时 168小时 指示剂编号 24小时 48小时 168小时
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
                     
      检查人   检查日期  
      复核人   复核日期  
       
       
       
       
       
       
      附表11生物指示剂孢子数量确认记录
      生物指示剂孢子数量确认记录
      编号:                            版本号:00                         第1页 共1页
      日期  
      生物指示剂名称  
      生物指示剂批号  
      生产厂家  
      有效日期  
      使用部门  
      热处理温度  
      热处理时间 自      :     至      :      ,共       分钟
      培养基名称  
      培养基批号  
      0.9%氯化钠溶液批号  
      培养温度  
      培养时间  
      结果
      稀释级    
      接种量(ml)    
      计数结果 1 2 平均 1 2 平均
                 
      孢子数量    
      平均孢子数量  
      标准规定 每片/支生物指示剂的活芽孢数量不少于1×106
      结论 符合规定□                不符合规定□
      操作者/日期  
      复核者/日期  
       
       
       
       
       
       
      附表12物品菌落检测记录
      物品菌落检测记录Ⅰ
      编号:               版本号:00                第1页共1页
      物品名称 样品编号 检测结果
      cfu
      空白对照
        A        
        B        
        C        
        D        
        E        
        F        
        A        
        B        
        C        
        D        
        E        
        F        
      确认人/日期 复核人/日期
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表13物品菌落检测记录
       
      物品菌落检测记录Ⅰ
      编号:               版本号:00                第1页共1页
      物品名称 样品编号 检测结果
      cfu
      空白对照
        A24        
        B24        
        C24        
        D24        
        E24        
        F24        
        G24        
        H24        
        L24        
        I24        
        K24        
      确认人/日期 复核人/日期
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
      附表15偏差处理与分析报告表
       
      偏差处理与分析报告表
      编号:                              版本号:00                         第1页 共1页
      偏差说明:
       
       
      签字/日期:
      偏差的分类
      □一般         □重大
      偏差情况调查:
       
       
       
      签字/日期:
      采取的措施(如需要,应另附文件)
       
       
       
      签字/日期:
      质量部意见:
       
       
                                                    
        签字/日期:
      处理结果:
       
       
       
      签字/日期:
      附表16验证变更申请表
      验证变更申请表
      编号:                            版本号:00                         第1页 共1页
      申请部门   申请日期  
      申请人   实施负责人  
      验证项目名称  
      变更内容(详细说明)  
      变更
      理由
       
      变更
      部门
      意见
      审核人(验证变更部门负责人):                         年   月   日
      质量部
      意见
          审核人(QA):                                        年   月   日
      验证领导小组组长意见 批准人(质量副总):                                    年   月   日
               
       
       
       
       
       
      附录15:标准热电偶分布图
      标准热电偶分布图
       
       
       
      注:1、2、3、4——灭菌室前门剖面四顶点,5、6、7、8——灭菌室后门剖面四顶点,9、10、11、16——灭菌室中间剖面四顶点,13——灭菌室中间剖面中心点,14—压缩空气入口,15—蒸汽入口,12--在冷凝水排放处(箱体底部)和温度控制和记录的传感器旁(箱体底部)。